A2型生物安全柜工作原理：空氣由前新風口進入負壓風道與柜體內空氣充分混合后，由風機送入靜壓箱，經過濾器過濾后以垂直層流的狀態進入操作區，操作區左右及后部墻體均為負壓風道，使工作區與外部環境形成氣幕及箱體雙層隔離。同時工作區被負壓包圍，保證樣品不發生泄漏，操作區的氣流由于排風機的作用，通過負壓風道與新風口進入的空氣混合后，其中部分混合氣體(約70%)由風機送入靜壓箱循環使用，其余混合氣體(約30%)經排風過濾器過濾后排出柜體。

　　柜體氣密，全排放式，所有氣體不參與循環，工作人員通過連接在柜體的手套進行操作，俗稱手套箱(Golve box)，試驗品通過雙門的傳遞箱進出安全柜以確保不受污染，適用于高風險的生物試驗。如果不允許循環化學氣體，則必須使用裝備硬管的B2型生物安全柜。由于B型安全柜不是獨立平衡系統，它的內置風機只能制造下沉氣流，安全柜依賴外排風機制造進氣流。這種型號的安全柜在安裝和維護時會較為復雜，因為外排風機必須與內置風機保持平衡，否則將導致對操作人員或產品的安全性能的失效。

　　在允許循環化學氣體的操作條件下，可以使用外接排放管道蓋(Exhaust Collar)的A2型生物安全柜。排放管道蓋與一般硬管不同的是有可吸入空氣的進氣孔；排放管道蓋與外排管道連接，然后接到一個外排風機。排放管道蓋上的進氣孔對于A2型生物安全柜通過內置風機保持進氣流和下沉氣流的平衡至關重要。如果使用密封的外接風管，進氣流將會過強可能導致安全柜對產品的保護實效；而排放管道蓋上的進氣孔可以從室內吸入空氣，而不會影響安全柜內的氣流平衡。此條件只適用于微量有毒化學物質。

　　A2型生物安全柜被廣泛應用于衛生、食品安全、生物制藥等領域，其主要作用是保護操作原代培養物、菌毒株及診斷性標本等具有感染性實驗材料的實驗者，避免在操作過程中可能產生的感染性氣溶膠或濺出物帶來的危害，同時，還可起到保護實驗室環境及實驗樣本的作用。是實驗室不可少的安全防護設備。在器械分類目錄中被界定為三類器械。